형질전환실험실 연구지원

 

목적

  • 연구지원 차원의 컨설팅 서비스와 Transgenic / Knock-out mouse의 유지 및 생산 지원

 

연구지원 내역

  • 수정란과 정액의 동결보존(Embryo / Sperm Preservation)
    - 미생물학적 오염 발생시 대비 및 반영구적인 장기보관 서비스 의뢰 원칙
    • 의뢰원칙
      ① 의뢰된 mouse를 통하여 얻은 수정란 및 정액은 동결하여 보관한다.
      ② 수정란과 정액의 동결 및 유지에 소요되는 비용은 특수생명자원센터에서 부담한다.
      ③ 의뢰자는 성성숙된(12주령 이상) 10마리 이상의 male을 제공하며 Hetero mating을 원칙으로 한다. 또한, 10마리 미만일 경우와 Homo mating일 경우 특수생명자원센터와 협의한다.
      ④ 특수생명자원센터는 4회 과배란 처리 후 획득한 2-cell stage 수정란을 동결 보존하며, 정액 동결을 병행한다 .
      ⑤ 특수생명자원센터에서 보존중인 동결수정란의 정보(strain명, 의뢰자명)는 의과대학의 자체규정에 따라 정보 공개를 하지 않음을 원칙으로 한다.
      ⑥ 동결된 수정란과 정액의 소유권은 의뢰자에게 있다.
      ⑦ 보존된 수정란 및 정액의 사용 시 정해진 서식에 따라 신청하며, 실비 수준의 수수료를 부과한다.
      ⑧ 의뢰된 mouse의 동결보존 여부 및 순서는 특수생명자원센터에서 결정한다.
  • Mouse 청정화(Embryo transfer / C-sec)
    • 의뢰원칙
      ① 모니터링 성적서는 필수, 모니터링 성적서에 아래의 항목에 대한 감염이 있는 경우 반려될 수 있습니다.
      • i. 인수공통전염병
      • ii. 마우스에 치명적인 pathogen
      • iii. 전염성이 매우 높아 다른 시설에 오염을 유발할 수 있는 pathogen (virus, 요충 등)

      ② 의뢰된 mouse는 mating이 가능한 2 pair 이상 제공을 원칙으로 합니다
      ③ 소요기간 – 12주 (의뢰된 mouse를 통하여 얻은 F1 또는 F2 female을 egg donor로 사용)
      ④ 종료기준 – knock-out mouse: male 1두, female 1두 생산
      Transgenic mouse: 성별에 관계없이 1두 생산
      ⑤ 의뢰된 mouse의 수량이 적거나, mating 효율이 좋지 못 할 경우 평균 소요기간 보다 길어질 수 있습니다
      ⑥ Embryo transfer 원칙을 충족하지 못할 경우 협의 후 C-sec으로 대체될 수 있습니다
      ⑦ 과제 종료 후 수수료를 부과한다.(사육 수수료 별도)

  • 유전자이식 생쥐 생산(DNA microinjection)
    - C57BL/6 기반의 transgenic mouse 생산 서비스
    • 절차
      ① 생산 계획서 제출
      ② 특수생명자원센터 전문위원 심의 후 제작 허가여부 결정
      ③ 연구기술지원 신청서 작성 및 접수
      ④ 생산 동의서 제출
      ⑤ 샘플 접수 및 제작 개시font-family:'NanumGothic','돋움';
    • 의뢰 시 필요한 sample
      ① Plasmid DNA 50㎍이상
      • i. Kit 이용 (midi나 maxi prep)
      • ii. Labeling 후 parafilme 밀봉
      • iii. Agarose gel 상의 농도 측정 사진 첨부
      • iv. promoter-gene of interest- poly A site를 한꺼번에 꺼낼 enzyme 명시 및 cut 사진 첨부

      ② Primer

      • i. 3’, 5’ 각각 100pmol/ul 농도 –50ul이상
      • ii. Sequence와 vector map상의 primer 위치 표시
      • iii. PCR 반응 온도와 조건 및 PCR 확인사진 첨부
      • iv. Primer 제작 시 유의사항  insert 유전자를 detection하되 PCR product size가 300bp ~ 1kb 정도  primer는 20mer정도의 길이로 Tm값은 60도 안팎
    • 유의사항
      • ① Screening을 위한 sampling - 산자가 3주령일 때 실시하며, 사육 편의를 위하여 2주 내에 메일로 결과 교환
        ② 정확도를 높이기 위하여, 센터와 연구자가 동시에 PCR screening 진행
        ③ 메일로 교환한 결과에 의거하여, 연구자가 원하는 사육공간으로 반드시 2주 내에 동물 이동
        ④ 사육수가는 5주령 시점부터 책정
        ⑤ 제작된 Transgenic mouse는 Genomic DNA의 PCR 확인 결과로 센터의 연구지원은 DNA 존재유무에 한정
        ⑥ 산자 30마리 이상 또는 양성 산자 4~5마리 생산 후 과제 종료
        ⑦ 과제 종료 후 수수료 부과
  • 유전자제거 생쥐 생산(ES cell microinjection)
    • 129/B6 chimera 생산 및 Germ line transmission 확인 (2007년
      B6/B6-tyr chimera 생산 및 Germ line transmission 확인 (2008년)                    

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